第六节 原位聚合酶链反应及其他原位标记技术
分类：现代医学实验技巧1167字
一、原位聚合酶链反应原位聚合酶链反应(PCR in situ)指在细胞及组织切片的原位应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction， PCR)扩增某些待检靶核酸。本节不介绍PCR引物，请参阅分子生物化学技术。
试剂配制与准备：
A.0.1mol/L PBS，pH7.0
B.0.1mol/L HCl
C.蛋白酶K 10μg/ml或3～5μg/ml，用10mg/ml的贮存液稀释
D.0.1%甘氨酸，用0.1mol/L PBS，pH7.5配制
E.2× PCR缓冲液
含20mmol/L Tris-HCl，pH8.4;100mmol/L KCl;3mmol/L MgCl2;0.02%颗粒明胶(Difco)。
配制方法：
过滤除菌，分装，0.5ml 1份，-20℃保存。
F.dATP、dGTP、dTTP、dCTP，各20mmol/L
G.α-35S-dCTP(按提供者说明书)370kBq/ml(10μCi/ml)
亦可用α-3H-dNTP，方法与35S标记者相同，但最后显示信号时应“曝光”3～4周
H.引 ...... （共1167字） [阅读本文]>>
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